Con l'evolversi delle tecniche di fertilizzazione in vitro, la Diagnosi Genetica Preimpianto (PGD) si è proposta come una nuova metodologia intesa ad identificare, prima dell'impianto in utero, la presenza di malattie genetiche nell'embrione generato in vitro da coppie ad elevato rischio riproduttivo. Le difficoltà intrinseche a tale approccio diagnostico (analisi genetica da singola cellula, Allele DropOut, amplificazione preferenziale, rischio di contaminazione, etc.) richiedono lo sviluppo di protocolli di analisi di mutazione sensibili ed accurati, che producano risultati univoci ed attendibili. La nostra strategia di PGD è stata basata sull’impiego di un protocollo di analisi di mutazione che potesse essere a rivelazione fluorescente, automatizzato e prevedere l’impiego di un procedura comune, indipendentemente dalle specifiche mutazioni da investigare. Recentemente é stato introdotto un nuovo metodo di analisi genetica, denominato Minisequencing. Tale tecnica permette l'esatta determinazione e la visualizzazione computerizzata di una specifica mutazione senza operare il sequenziamento dell'intero prodotto di amplificazione, mantenendo le medesime caratteristiche qualitative dell’ analisi di sequenza. Le caratteristiche del minisequencing, quali l’elevata sensibilità, l’automazione, la rapidità di esecuzione, la semplicità interpretativa, la possibilità di investigare più siti di mutazione contemporaneamente (“multiplexing”), e soprattutto l’impiego di una procedura comune per ciascuna diversa mutazione da analizzare, rappresentano dei parametri di fondamentale importanza nella PGD. In questo studio descriviamo i risultati ottenuti dall'applicazione della metodica del minisequencing in 69 cicli di PGD di diverse patologie, quali Fibrosi Cistica, -Talassemia, Anemia Falciforme, Emofilia A e B, Retinoblastoma, Atrofia Muscolare Spinale (SMA), Lesch-Nyhan, e Wiskott-Aldrich, di cui 7 cicli con HLA matching. Ad oggi sono state ottenute 18 gravidanze, dalle quali sono nati 12 bambini sani mentre le restanti sono in gestazione. I nostri risultati indicano che il minisequencing rappresenta un metodo di analisi genetica affidabile e di facile impiego, applicabile alla PGD su singola cellula.